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氯金酸（HauC14）是主要還原材料，常用還原劑有檸檬酸鈉、鞣酸、抗壞血酸、白磷、硼氫化鈉等。根據(jù)還原劑類型以及還原作用的強(qiáng)弱，可以制備0。8nm～150nm不等的膠體金。最常用的制備方法為檸檬酸鹽還原法。具體操作方法如下： ● 將HauC14先配制成0。 ??01％水溶液，取100ml加熱至沸。 ● 攪動(dòng)下準(zhǔn)確加入一定量的1％檸檬酸三鈉（Na3C6H5O7·2H2O）水溶液。 ● 繼續(xù)加熱煮沸15min。此時(shí)可觀察到淡黃色的氯金酸水溶液在檸檬酸鈉加入后很快變灰色，續(xù)而轉(zhuǎn)成黑色，隨后逐漸穩(wěn)定成紅色。 ??全過程約2～3min。 ● 冷卻至室溫后用蒸餾水恢復(fù)至原體積。 用此法可制備16～147nm粒徑的膠體金。金顆粒的大小取決于制備時(shí)加入的檸檬酸三鈉的量。表19-1列舉制備4種不同粒徑膠體金時(shí)檸檬酸三鈉的用量。 表19-1 四種粒徑膠體金的制備及特性 膠體金粒徑（nm） 1％檸檬酸三鈉加入量（ml）* 膠體金特性 呈色 λmax 16 2。 ??00 橙色 518nm 24。5 1。50 橙紅 522nm 41 1。00 紅色 525nm 71。5 0。70 紫色 535nm *還原100ml0。01％HauC14所需量 2．注意事項(xiàng) ● 氯金酸易潮解，應(yīng)干燥、避光保存。 ?? ● 氯金酸對(duì)金屬有強(qiáng)烈的腐蝕性，因此在配制氯金酸水溶液時(shí)，不應(yīng)使用金屬藥匙稱量氯金酸。 ● 用于制備膠體金的蒸餾水應(yīng)是雙蒸餾水或三蒸餾水，或者是高質(zhì)量的去離子水。 ● 是以制備膠體金的玻璃容器必須是絕對(duì)清潔的，用前應(yīng)先經(jīng)酸洗并用蒸餾水沖凈。 ??最好是經(jīng)硅化處理的，硅化方法可用5％二氯甲硅烷的氯仿溶液浸泡數(shù)分鐘，用蒸餾水沖凈后干燥備用。 ● 膠體金的鑒定和保存：膠體金的制備并不難，但要制好高質(zhì)量的膠體金卻也并非易事。因此對(duì)每次制好的膠體金應(yīng)加以檢定，主要檢查指標(biāo)有顆粒大小，粒徑的均一程度及有無凝集顆粒等。 ?? 肉眼觀察是最基本也是最簡單和方便的檢定方法，但需要一定的經(jīng)驗(yàn)。良好的膠體金應(yīng)該是清亮透明的，若制備的膠體金混濁或液體表面有漂浮物，提示此次制備的膠體金有較多的凝集顆粒。在日光下仔細(xì)觀察比較膠體金的顏色，可以粗略估計(jì)制得的金顆粒的大小。當(dāng)然也可用分光光度計(jì)掃描λmax來估計(jì)金顆粒的粒徑。 ??結(jié)制備的膠體金最好作電鏡觀察，并選一些代表性的作顯微攝影，可以比較精確地測(cè)定膠體金的平均粒徑。 膠體金在潔凈的玻璃器皿中可較長時(shí)間保存，加入少許防腐劑（如0。02％NaN3）可有利于保存。保存不當(dāng)時(shí)會(huì)有細(xì)菌生長或有凝集顆粒形成。少量凝集顆粒并不影響以后膠體金的標(biāo)記，使用時(shí)為提高標(biāo)記效率可先低速離心去除凝集顆粒。 ?? 免疫金的特性和制備 。